پی سی آر (پولیمریز چین کے رد عمل) کے تجربات میں ، پیکیجنگ آسان معلوم ہوسکتی ہے ، لیکن اس سے براہ راست ریجنٹ استحکام ، استعمال میں آسانی اور قابل اعتماد نتائج پر اثر پڑتا ہے۔ چاہے لیب کو ذخیرہ کرنا اور ٹرانسپورٹ کرنا - تیار شدہ ریجنٹس یا کمرشل پریمکسز ، پی سی آر کی مناسب پیکیجنگ تکنیکوں میں مہارت حاصل کرنا عام غلطیوں سے بچ سکتا ہے اور تجرباتی کارکردگی کو بہتر بنا سکتا ہے۔ ذیل میں ، ہم مادی انتخاب ، پیکیجنگ کی حکمت عملی ، اور اسٹوریج کی تفصیلات سے متعلق عملی نکات بانٹتے ہیں۔
I. پیکیجنگ میٹریل کا انتخاب: مطابقت اور حفاظتی صلاحیت کو ترجیح دینا
پی سی آر کے رد عمل درجہ حرارت ، روشنی اور آلودگیوں کے ل sensitive حساس ہیں ، لہذا پیکیجنگ مواد کو لازمی طور پر تین اہم ضروریات کو پورا کرنا چاہئے: ہوا سے چلنے والی ، روشنی - پروفنگ ، اور کیمیائی جڑنی۔
سنٹرفیوج ٹیوبوں اور پی سی آر پلیٹوں کے لئے ، پولی پروپیلین (پی پی) کو ترجیح دی جاتی ہے ، اس کی اعلی شفافیت اور DNase/rnase - مفت خصوصیات . 0.2 ml پتلی -}}}}}}}}}}}}}} کی منتقلی کے لئے مثالی ہیں ، 0.5 ملی لیٹر کے ٹیوبیں بہترین ہیں۔ 96 - اچھی طرح سے پی سی آر پلیٹوں کے ل we ، ہم تجویز کرتے ہیں کہ اسکرٹڈ ڈیزائن (روبوٹک ہیرا پھیری میں آسانی کے ل)) یا غیر اسکرٹڈ ڈیزائن (خلائی تحفظ کے لئے) منتخب کریں۔
سگ ماہی کا طریقہ: روایتی سنٹرفیوج ٹیوبیں فلیٹ یا اٹھائے ہوئے ٹوپیاں استعمال کرتی ہیں (بخارات اور خشک ہونے سے بچنے کے لئے)۔ تاہم ، طویل - ٹرم اسٹوریج کے لئے ، گرمی - سگ ماہی فلم (جیسے پیرافلم) یا سانس لینے والی فلم (جیسے ایراسیل) کو اندرونی اور بیرونی دباؤ میں توازن برقرار رکھنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ پی سی آر پلیٹوں کو چپکنے والی ایلومینیم ورق سیلرز (اعلی - درجہ حرارت مزاحم) یا خود - چپکنے والی فلم (سنگل - استعمال کے لئے) استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔
لائٹ پروٹیکشن: لائٹ -} حساس اجزاء (جیسے کچھ رنگ یا پرائمر) پر مشتمل ریجنٹس ایلومینیم ورق میں لپیٹنا چاہئے ، یا سیاہ پی سی آر پلیٹوں (کچھ مینوفیکچررز سے دستیاب) استعمال کرنا چاہئے۔
ii. الکوٹنگ تکنیک: بار بار منجمد سے ہونے والے نقصانات کو کم کرنا - پگھلنے والے چکروں کو کم کرنا
ایلیکوٹنگ ریجنٹس پی سی آر پیکیجنگ کا ایک بنیادی اقدام ہے اور تجرباتی تولیدی صلاحیت کو براہ راست متاثر کرتا ہے۔
ماسٹر مکس الیوکوٹنگ: تجارتی ماسٹر مکسز (جیسے ٹی اے کیو انزائم اور ڈی این ٹی پی مکس) کو رد عمل کے حجم کے علاوہ 5 ٪ - 10 ٪ مارجن (جیسے ، 20 μl رد عمل کے لئے ، ایلیکوٹ 22 μl فی ٹیوب) کی بنیاد پر منسلک کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ بلک پیکیجنگ سے براہ راست استعمال کرنے سے گریز کریں ، کیونکہ بار بار منجمد - پگھلنے والے سائیکل انزائم کی سرگرمی میں کمی کا باعث بن سکتے ہیں (ٹی اے کیو انزائم تقریبا 5 فیصد سرگرمی فی منجمد پگھل چکر میں کھو سکتا ہے)۔
پرائمر اور ٹیمپلیٹس: پرائمر (خاص طور پر کسٹم پرائمر) کو 100 μm اسٹاک حل سے منسلک کرنے کی سفارش کی جاتی ہے اور اسے - 20 ڈگری پر محفوظ کیا جاتا ہے۔ استعمال سے پہلے کام کرنے والے حراستی (عام طور پر 0.1–1 μm) میں پتلا کریں۔ جینومک ڈی این اے جیسے ٹیمپلیٹس کو سنگل {{7} میں الگ الگ ہونا چاہئے۔
آلودگی سے بچاؤ کے نکات: یقینی بنائیں کہ سنٹری فیوج ٹیوبیں الکوٹنگ سے پہلے خشک ہوں (بقایا ایتھنول پی سی آر کو روک سکتا ہے) ، پری - ٹھنڈی پپیٹ ٹپس کو سرد ری ایجنٹوں کو دیوار سے چپکنے سے روکنے کے ل and ، اور جلد کے ڈی این اے کی آلودگی سے بچنے کے لئے پورے عمل میں دستانے پہنیں۔
iii. لیبلنگ اور ریکارڈ کیپنگ: "بلیک باکس" کے جال سے پرہیز کریں
پی سی آر پیکیجنگ کے لئے واضح لیبلنگ بہت ضروری ہے۔ غلط لیبلنگ پورے تجربے کو برباد کر سکتی ہے۔
لازمی طور پر لیبلنگ کی معلومات: ریجنٹ نام (جیسے ، "2 × ٹاک ماسٹر میکس") ، حراستی/مواد (جیسے ، "10 ملی میٹر ڈی این ٹی پی ایس") ، بیچ نمبر (ٹریس ایبلٹی کے لئے) ، اسٹوریج کے حالات (جیسے ، "روشنی سے محفوظ" -20 ڈگری ") ، الکوٹ کی تاریخ ، اور میعاد ختم ہونے کی تاریخ (جیسے ، 6 ماہ کے اندر استعمال کریں")۔
خصوصی لیبلنگ: اگر ریجنٹ میں گلیسٹرول (اینٹیفریز) ، رنگ (جیسے ، ایس وائی بی آر گرین) ، یا اضافی (جیسے ، بی ایس اے) ہوتا ہے تو ، اضافی معلومات فراہم کی جانی چاہئیں (جیسے ، "50 ٪ گلیسٹرول پر مشتمل ہے ، اعلی درجہ حرارت پر ذخیرہ نہ کریں")۔
ریکارڈ ہم وقت سازی: ہر ٹیوب کے مندرجات (جیسے ، پرائمر تسلسل ، ٹی ایم ویلیو) کے تفصیلی پیرامیٹرز کو ریکارڈ کرنے کے لئے اسپریڈشیٹ یا لیبارٹری مینجمنٹ سوفٹ ویئر (جیسے لیبگورو) استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے اور انہیں جسمانی لیبل نمبر کے ساتھ جوڑنے کی سفارش کی جاتی ہے۔
iv. ذخیرہ اور نقل و حمل: درجہ حرارت اور جسمانی تحفظ میں توازن
پی سی آر ریجنٹس کی استحکام اسٹوریج کے حالات پر انتہائی انحصار کرتا ہے ، اور نقل و حمل کے دوران اضافی تحفظ کی ضرورت ہوتی ہے۔
عام اسٹوریج:
انزائمز (ٹی اے کیو ، ریورس ٹرانسکرپٹیس): لمبی - ٹرم اسٹوریج - 20 ڈگری پر (بار بار منجمد کرنے والے چکروں سے پرہیز کریں al آئیکوکوٹ اور مستقبل کے استعمال کے لئے -80 ڈگری پر اسٹور کریں) ؛
پرائمر/پروبس: 1 سال سے زیادہ کے لئے -20 ڈگری پر اسٹور کریں (اگر کسی ترمیم شدہ گروپ پر مشتمل ہو جیسے بائیوٹین ، روشنی سے حفاظت کریں) ؛
غیر - انزائم بفرز (جیسے ، پی بی ایس): مختصر - اصطلاح اسٹوریج 4 ڈگری (1 مہینے تک) میں۔
نقل و حمل کی ضروریات:
کولڈ چین کی نقل و حمل کے لئے ، خامروں کے لئے خشک برف (- 78 ڈگری) استعمال کریں (-20 ڈگری سے نیچے برقرار ہے) ، اور مختصر مدت کی نقل و حمل کے لئے بفرز کے لئے نیلے رنگ کی برف (تقریبا 0 ڈگری) استعمال کریں۔
ضرورت سے زیادہ کمپن سے پرہیز کریں (کنوؤں کے مابین ریجنٹس کے اختلاط کو روکنے کے لئے پی سی آر پلیٹوں کو جھاگ خانوں میں محفوظ کیا جانا چاہئے)۔
موسم گرما کے اعلی درجہ حرارت کے دوران ، پیکیجنگ میں ایک موصل پرت شامل کریں (جیسے ، ایلومینیم ورق موصلیت کا بیگ + منجمد جیل پیک)۔
V. عام مسائل اور حل
مسئلہ 1: ریجنٹ بارش (جیسے ، کم درجہ حرارت پر DNTPS یا MGCL₂ بارش) → حل: مختصر طور پر سینٹرفیوج (1000 RPM ، 1 منٹ) الکوٹنگ سے پہلے۔ استعمال سے پہلے 37 ڈگری انکیوبیٹر میں تحلیل کریں اور اچھی طرح مکس کرنے کے لئے بںور۔
مسئلہ 2: پلیٹ سیلر آسانی سے چھلکتا ہے → حل: ایک چپکنے والی پشت پناہی کے ساتھ حرارت - مزاحم سیلر کا انتخاب کریں ، یا گرمی کا مہر استعمال کریں (اعلی - تھروپپٹ تجربات کے لئے موزوں)۔
مسئلہ 3: دھندلا ہوا لیبل → حل: واٹر پروف مارکر (جیسے ایک شارپی) یا لیزر - پرنٹ لیبلز کو شراب سے مٹ جانے سے روکنے کے ل lab پرنٹ لیبل استعمال کریں۔
نتیجہ
پی سی آر پیکیجنگ صرف "پیکیجنگ" ریجنٹس سے زیادہ ہے۔ یہ تجرباتی وشوسنییتا کے لئے دفاع کی پہلی لائن ہے۔ مناسب مواد کو منتخب کرکے ، الکوٹنگ کے عمل کو معیاری بناتے ہوئے ، مکمل لیبلنگ کو برقرار رکھنا ، اور نقل و حمل کے دوران سخت درجہ حرارت پر قابو پانے کو برقرار رکھنے کے بعد ، آپ انسانی غلطی کو نمایاں طور پر کم کرسکتے ہیں ، اس کے نتیجے میں مستحکم ہونے والے امپلیفیکیشن رد عمل اور زیادہ قابل اعتماد نتائج کو یقینی بناتے ہیں۔ یاد رکھیں: تفصیلات کامیابی کا تعین کرتی ہیں۔ مناسب پی سی آر پیکیجنگ کے طریقوں سے آپ کے پورے تجربے میں اہم وقت کی دشواریوں کا ازالہ ہوسکتا ہے!